Frequência de anticorpos irregulares identificados em pacientes atendidos em um hemonúcleo no sudoeste do Paraná no ano de 2017 / Frequency of irregular antibodies identified in patients treated at the hemotherapy service in southwest of Paraná in 2017

Quando um indivíduo é exposto a antígenos eritrocitários não próprios, ocorre uma resposta imunológica, que leva à produção de anticorpos irregulares voltados contra esses antígenos. Esse processo é conhecido como aloimunização eritrocitária e acontece em decorrência de transfusões de sangue ou gestações incompatíveis. Na medicina transfusional a pesquisa de anticorpos irregulares é fundamental, pois a falha na detecção de um aloanticorpo pode provocar reações transfusionais, aloimunizações, anemias hemolíticas autoimunes e doença hemolítica perinatal. Este estudo tem por objetivo analisar a frequência de anticorpos irregulares de pacientes atendidos no Hemocentro Regional de Francisco Beltrão, Paraná, no ano de 2017. Os dados foram coletados a partir da revisão de registros em arquivos do Laboratório de Imunohematologia do Hemonúcleo. Foram avaliados dados de 49 protocolos de pacientes que apresentaram dificuldades transfusionais no ano de 2017. Dentre os pesquisados, 37 pacientes (75,5%) apresentaram anticorpos irregulares. Dentre os anticorpos anti-eritrocitários observados neste estudo, evidenciou-se a presença de doze pacientes com anti-D (27,2%), seis pacientes com anti-K (13,6%), quatro pacientes com anti-C (9,0%) e em seis pacientes (13,6%) foi observada a presença de autoanticorpos. Este estudo indica que, nos pacientes transfundidos, os anticorpos mais frequentes foram os aloanticorpos Anti-D do Sistema Rh, provavelmente devido ao seu alto grau de imunogenicidade. A prevalência desses anticorpos é semelhante a vários estudos encontrados na literatura.

When an individual is exposed to not-self red blood cell antigens, an immune response occurs, which leads to the production of irregular antibodies directed against these antigens. This process is known as erythrocyte alloimmunization and occurs as a result of blood transfusions or incompatible pregnancies. In transfusion medicine, the search for irregular antibodies is essential, since failure to detect an alloantibody can cause transfusion reactions, alloimmunizations, autoimmune hemolytic anemias, and perinatal hemolytic disease. This study aims at analyzing the frequency of irregular antibodies of patients seen at the Regional Blood Center of Francisco Beltrão, Paraná, in 2017. The data were collected from the review of records in files of the Immunohematology Laboratory of Hemonúcleo. Data from 49 protocols of patients who had transfusion difficulties in 2017 were evaluated. Among those surveyed, 37 patients (75.5%) had irregular antibodies. Among the anti-erythrocyte antibodies observed in this study, the presence of twelve patients with anti-D (27.2%), six patients with anti-K (13.6%), four patients with anti-C (9.0 %), and in six patients (13.6%) with the presence of autoantibodies were observed. This study indicates that, in transfused patients, the most frequent antibodies were the Rh System Anti-D alloantibodies, probably due to their high degree of immunogenicity. The prevalence of these antibodies is similar to several studies found in the literature.

Development and characterization of polyclonal antibodies against the linker region of the telomere-binding protein TRF2

Background: TRF2 (telomeric repeat binding factor 2) is an essential component of the telomere-binding protein complex shelterin. TRF2 induces the formation of a special structure of telomeric DNA and counteracts activation of DNA damage-response pathways telomeres. TRF2 has a poorly characterized linker region (udTRF2) between its homodimerization and DNA-binding domains. Some lines of evidence have shown that this region could be involved in TRF2 interaction with nuclear lamina. Results: In this study, the fragment of the TERF2 gene encoding udTRF2 domain of telomere-binding protein TRF2 was produced by PCR and cloned into the pET32a vector. The resulting plasmid pET32a-udTRF2 was used for the expression of the recombinant udTRF2 in E. coli RosettaBlue (DE3). The protein was isolated and purified using ammonium sulfate precipitation followed by ion-exchange chromatography. The purified recombinant protein udTRF2 was injected into guinea pigs to generate polyclonal antibodies. The ability of anti-udTRF2 antibodies to bind endogenous TRF2 in human skin fibroblasts was tested by western blotting and immunofluorescent staining. Conclusions: In this study, the recombinant protein udTRF2 and antibodies to it were generated. Both protein and antibodies will provide a useful tool for investigation of the functions of the udTRF2 domain and its role in the interaction between TRF2 and nuclear lamina.

Verificação da transmissão vertical de Neospora spp. em equinos / Verification of vertical transmission of Neospora spp. in horses.

O gênero protozoário Neospora é reconhecido como causador de desordens reprodutivas e abortos em bovinos. Entre os equinos pouco se sabe sobre os efeitos da infecção por estes protozoários. Atualmente é admitido que os efeitos da infecção por Neospora hughesi em equinos possam ocorrer no sistema nervoso central e, os efeitos provocados pela infecção por Neospora caninum recaiam sobre o sistema reprodutor de éguas. O presente trabalho verificou a presença de imunoglobulinas da classe G no soro sanguíneo de uma população de éguas de cria e, em seus respectivos potros antes da ingestão do colostro. Para execução deste trabalho foi empregada técnica de imunofluorescência indireta (RIFI), utilizando como antígeno taquizoítos de Neospora caninum, a diluição inicial dos soros das éguas foi de 1:50 e a diluição do soro dos potros empregada foi de 1:16. Foram assistidos 78 partos e todos os potros tiveram seu soro sanguíneo coletado imediatamente após o nascimento. A pesquisa de anticorpos contra Neospora spp. apontou que 50 (64%) éguas e 32 (41%) potros foram positivos. Das 50 éguas que apresentaram anticorpos contra Neospora spp. 24 geraram potros positivos. Entre as 28 éguas que não reagiram, oito deram a luz a potros positivos. De posse dos resultados encontrados podemos concluir que ocorreu a transmissão vertical de Neospora spp. nos equinos pesquisados...

The genre protozoan Neospora is recognized as causing reproductive disorders and miscarriages in cattle. Among the horses little is known about the effects of infection by these protozoa. It is currently accepted that the effects of infection by Neospora hughesi in horses may occur in the central nervous system, and effects of Neospora caninum infection occur in the reproductive system of mares. The present study examined the presence of class immunoglobulin G in blood serum of a population of brood mares and their foals before colostrum ingestion. For this assignment was employed indirect immunofluorescence assay (IFA) using as antigen tachyzoites of Neospora caninum, the initial dilution employed in sera of the mares was 1:50 and dilution in the serum of foals was 1:16. Were assisted 78 deliveries and all foals had their blood serum collected immediately after birth. The presence of antibodies against Neospora spp. found in mares was 50 (64%) and 32 (41%) foals were positive. Of the 50 mares that had antibodies to Neospora spp. 24 generated positive foals. Among the 28 mares unreacted eight gave birth to foals positive. Having the results we can conclude that vertical transmission occurred Neospora spp. researched in horses...

Ocorrência de anticorpos anti-Neospora spp. em jumentos (Equus asinus) no estado de Sucre - Colômbia / Occurrence of anti-Neospora spp. Antibodies in donkeys (Equus asinus) in the state of Sucre - Colombia

A neosporose tem grande importância em bovinos, e sua patogênese neste hospedeiro, em termos gerais, está esclarecida, porém, em equídeos é pobremente conhecida. Na Colômbia ainda não foram reportados anticorpos Anti-Neospora spp. em equídeos, sendo assim objetivou-se no presente estudo avaliar a ocorrência do parasito em jumentos (Equus asinus) de fazendas que apresentavam risco da doença nestes animais. Foram utilizados 56 animais no estado de Sucre (Colômbia), escolhidos aleatoriamente dentro das fazendas selecionadas. Utilizou-se um peptídeo recombinante originado de Neospora caninum (NcGRA1) para o diagnóstico por Dot-ELISA, e o soro foi diluído em 1:200. Este estudo reporta, pela primeira vez no estado de Sucre e na Colômbia, a presença de anticorpos anti-Neospora spp. na espécie Equus asinus, com uma ocorrência de 19,7% (11/56) dos animais amostrados...

The neosporosis has great importance in cattle, and its pathogenesis in this host has been generally clarified, however, in horses, neosporosis is poorly known, and in Colombia anti-Neospora spp antibodies have not been reported. Therefore, the main objective in the present study was to evaluate the occurrence of this parasite in donkeys (Equus asinus) from farms that presented a risk of disease in these animals, as well as no health plan for them. Were used 56 animals randomly chosen inside selected farms in the state of Sucre (Colombia). A recombinant peptide originated from Neospora caninum (NcGRA1) was used for the diagnosis with Dot-ELISA and serum was diluted 1:200. This study is the first to report the presence of anti-Neospora spp. in donkeys (Equus asinus) in the state of Sucre, and in Colombia. The occurrence was in 19.7% of the animals sampled (11/56)...

Produção e purificação de imunoglobulinas Y policlonais anti-Leptospira spp / Production and purification of polyclonal anti-Leptospira immunoglobulin Y

Objetivou-se verificar se galinhas imunizadas com uma solução de Leptospira interrogans inativadas e proteínas de membrana externa do sorovar Hardjo, poderiam produzir anticorpos policlonais específicos anti-leptospiras, detectáveis em testes ELISA. Foram imunizados oito galinhas com 25 semanas de idade, da raça White Leghorn, sendo três imunizadas com uma suspensão de leptospiras inativadas, três com uma solução de proteínas de membrana externa extraída do sorovar Hardjo e duas controle. Coletas de sangue foram realizadas quinzenalmente e de ovos diariamente. A IgY foi purificada a partir da gema dos ovos utilizando para a delipidação o método de diluição em água ácida e a precipitação com sulfato de amônio. Nos testes ELISA realizados para verificar a especificidade da IgY, foi demonstrada a produção de anticorpos anti-Leptospira, tanto no soro quanto nas gemas purificadas. O pico de produção de anticorpos específicos ocorreu na 5º semana após a primeira imunização. Ficou demonstrada a possibilidade da indução da produção de anticorpos específicos em galinhas imunizadas com leptospiras do sorovar Hardjo inativadas, bem como, com proteínas de membrana externa (PME) extraidas desse sorovar. As galinhas imunizadas com uma suspensão de leptospiras inativadas ou com PME de Leptospira interrogans do sorovar Hardjo produziram anticorpos reativos a PME Hardjo detectáves por teste ELISA.

The aim was to determine whether hens immunized with an inactivated suspension of Leptospira and a solution of outer membrane proteins extracted from the serovar Hardjo, could produce specific polyclonal antibodies to Leptospira, detected in ELISA assay. Eight hens White Leghorn race with 25-weeks-old were immunized, three with an inactivated suspension of Leptospira, three with a solution of outer membrane proteins (OMP) extracted from the serovar Hardjo and two controls immunized with saline. Blood samples were collected fortnightly and eggs daily. The IgY was purified from the egg yolk using the method for the delipidation of dilution with water acidic and ammonium sulfate precipitation. The ELISA assay was performed to verify the specificity of the IgY, these was possible to observe the production of specific antibody to Leptospira both in serum and purified egg yolk. The specific antibody titers peaked in the fifth week post immunization. The production of polyclonal IgY was effective for producing high titers of specific antibodies.

Detection and quantification of Duffy antigen on bovine red blood cell membranes using a polyclonal antibody / Detecção e quantificação do antigeno Duffy nos eritrócitos de bovinos empregando um anticorpo policlonal

Babesiosis is one of the most important diseases affecting livestock agriculture worldwide. Animals from the subspecies Bos taurus indicus are more resistant to babesiosis than those from Bos taurus taurus. The genera Babesia and Plasmodium are Apicomplexa hemoparasites and share features such as invasion of red blood cells (RBC). The glycoprotein Duffy is the only human erythrocyte receptor for Pasmodium vivax and a mutation which abolishes expression of this glycoprotein on erythrocyte surfaces is responsible for making the majority of people originating from the indigenous populations of West Africa resistant to P. vivax. The current work detected and quantified the Duffy antigen on Bos taurus indicus and Bos taurus taurus erythrocyte surfaces using a polyclonal antibody in order to investigate if differences in susceptibility to Babesia are due to different levels of Duffy antigen expression on the RBCs of these animals, as is known to be the case in human beings for interactions of Plasmodium vivax-Duffy antigen. ELISA tests showed that the antibody that was raised against Duffy antigens detected the presence of Duffy antigen in both subspecies and that the amount of this antigen on those erythrocyte membranes was similar. These results indicate that the greater resistance of B. taurus indicus to babesiosis cannot be explained by the absence or lower expression of Duffy antigen on RBC surfaces.

As doenças infecciosas e parasitárias causam perdas importantes em vários setores da produção da pecuária mundial. Estima-se que mais de 600 milhões de bovinos de países tropicais e subtropicais estejam expostos à infecção por Babesia sp. gerando grande prejuízo econômico. Os gêneros Babesia e Plasmodium são hemoparasitas pertencentes ao filo Apicomplexa e apresentam características comuns no processo de invasão eritrocitária. A babesiose bovina causada por Babesia bigemina e Babesia bovis apresenta sinais clínicos similares a malária humana causada por Plasmodium vivax e Plasmodium falciparum. A glicoproteína Duffy é a única receptora para o P. vivax em humanos. A maioria dos indivíduos negros africanos é resistente a este parasita devido a uma mutação que provoca a ausência de expressão desta glicoproteína na superfície das hemácias. Tendo em vista este fato, e que animais da subespécie Bos taurus taurus são mais susceptíveis à babesiose quando comparados à animais Bos taurus indicus, objetivou-se neste trabalho a detecção e quantificação do antígeno Duffy na superfície dos eritrócitos de bovinos empregando para tal, anticorpo policlonal que permitisse investigar se as diferenças na susceptibilidade são devido a diferentes níveis de expressão do antígeno Duffy nas hemácias. Ensaios de ELISA mostraram que o anticorpo produzido foi capaz de reconhecer o antígeno Duffy presente nas hemácias bovinas e a análise quantitativa não demonstrou diferença significativa na presença do mesmo. Estes resultados sugerem que a resistência maior dos zebuínos à babesiose não se deve à ausência de expressão, ou à presença em menor quantidade do antígeno Duffy na superfície de suas hemácias.

Frequência de anticorpos para paratuberculose em bovinos no semiarido paraíbano / Frequency of antibodies against paratuberculosis in cattle in the state of Paraiba

A paratuberculose é uma doença importante em bovinos na Paraíba, tendo sido diagnosticados, pelo Hospital Veterinário da Universidade Federal de Campina Grande, cinco focos da doença nos últimos quatro anos. Neste trabalho objetivou-se realizar um estudo sorológico em rebanhos com e sem histórico da doença para estimar a frequência da infecção por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) em diferentes regiões do semiárido Paraibano. Utilizando o teste de ELISA pesquisou-se a frequência de animais soropositivos contra Map em duas fazendas onde tinha sido diagnosticada a doença, encontrando-se 72,22% (13/18) e 68,75% (11/16), respectivamente de bovinos sorologicamente positivos. Amostras de soro de 486 bovinos de 36 fazendas sem histórico da doença de diferentes regiões da Paraíba (sertão, cariri e agreste), também foram examinados por ELISA. A frequência de animais soropositivos foi de 10,08±1,07% (49/486). Foram encontrados animais positivos em 21 (58.33%) das 36 fazendas estudadas. Os resultados sugerem que o agente da paratuberculose está disseminado em bovinos na Paraíba e que são necessárias medidas de controle para diminuir a frequência de casos clínicos e subclínicos da doença.

Paratuberculosis is an important disease of cattle in the state of Paraíba, northeastern Brazil. In the Veterinary Hospital of the Federal University of Campina Grande, five outbreaks of paratuberculosis were diagnosed in the last four years. The objective of this paper is to report the frequency of antibodies against paratuberculosis in different regions of the state of Paraíba, in farms with previous diagnosis of the disease and in farms without diagnosis. The prevalence of antibodies against paratuberculosis, examined by ELISA, in two farms with cases of the disease, was of 72.22% (13/18) and 68.75% (11/16), respectively. Serum samples from 486 healthy cattle from 36 farms without paratuberculosis diagnosis, from three different regions of Paraíba (sertão, cariri, and agreste), were also examined by ELISA. The frequency of antibodies was 10.08±1,07% (49/486). Antibodies against paratuberculosis were found in 21 (58.33%) out of 36 farms examined. These results suggest that paratuberculosis is an important disease of cattle in the state of Paraíba and that control measures to decrease the prevalence of the disease are necessary.

Detecção de anticorpos anti - brucella abortus em humanos na cidade ribeirinha de Porto Figueira - Paraná / Detección de anticuerpos anti - brucella abortus en humanos de la ciudad de Porto Figueira - Paraná / Detection of antibody anti - brucella abortus in human being in the riverside town of Porto Figueira - Parana - Brazil

A brucelose é uma doença infecto-contagiosa provocada por bactérias do gênero Brucella, que ocasiona problemas de saúde importantes nos indivíduos que ingerem alimentos contaminados ou mantém um contato com animais infectados, podendo determinar quadros agudos, subagudos e principalmente, crônicos. Objetivou-se detectar anticorpos anti-Brucella abortus em humanos que vivem na cidade ribeirinha de Porto Figueira, PR, de forma a verificar o grau de infecção nesses humanos. Foram coletadas 99 amostras de sangue humano, e foram examinadas pelo Método de Soroaglutinação para detecção de anticorpos anti-Brucella abortus. Obteve-se 0,0% de resultados positivos para anticorpos anti-Brucella abortus, demonstrando a não contaminação dos humanosbteve-se 0,0% de resultados positivos para anticorpos anti-Brucella abortus, demonstrando a não contaminação dos humanos.

Brucellosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Brucella, which causes major health problems in people who ingest contaminated food or maintains contact with infected animals, may determine the acute, subacute and especially chronic. The objective was to detect antibodies to Brucella abortus in humans living in the riverside town of Porto Figueira, PR, in order to verify the degree of infection in these people. We collected 99 samples of human blood, and were examined by the agglutination test method for detecting antibodies to Brucella abortus. We obtained 0.0% positive results for anti-Brucella abortus, showing no contamination of humans.

La brucelosis es una enfermedad infectocontagiosa provocada por bacterias del género Brucella, que ocasiona problemas de salud importantes en los individuos que ingieren alimentos contaminados o mantienen contactos con animales infectados, pudiendo determinar cuadros agudos, subagudos y principalmente crónicos. Se buscó detectar anticuerpos anti-Brucella abortus en humanos que viven en la ciudad de Porto Figueira ? PR, cerca a un río, de forma a verificar el grado de infección en esos humanos. Se colectó 99 muestras de sangre humano, y fueron examinadas por el Método de Suero aglutinación para detección de anticuerpos anti-Brucella abortus. Se alcanzó 0,0% de resultados positivos para anticuerpos anti-Brucella abortus, no demostrando contaminación de los humanos.

Seroprevalence of antibodies to chlamydophila abortus in ovine in the state of Alagoas, Brazil

The goal of this study was to perform a seroepidemiological investigation and to identify risk factors associated with infection of Chlamydophila abortus of sheep herds in the Brazilian state of Alagoas. The study was conducted with samples of 274 ewes with ages equal to or higher than 24 months in 25 herds and in 23 towns located in three regions of the state (Sertão, Agreste and Eastern Alagoas). Anti-C. abortus antibodies were detected using the microcomplement fixation test. The risk factors, were determined based on questionnaires consisting of objective questions, about the farmer and general characteristics of the herd like size, sanitary situation and reproductive management. Among 274 sera samples analyzed for C. abortus, 59 (21.5 percent) were positive with titers >32, 187 (68.3 percent) negative and 28 (10.2 percent) suspect with titers >16. In the 23 towns studied, 20 had positive animals. Among herds 21 (77.7 percent) of had positive animals. The only variable which appeared to be significant in the multivariate analysis was the region, and Sertão was the most significant (p<0.001; OR=3.48; T.I. 1.79 - 6.76). Results indicate that infection by Chlamydophila abortus is widespread on sheep farms in the State of Alagoas. Others studies, however, have to be conducted to isolate the agent in order to confirm the role of the bacteria is reproductive disturbances in sheeps. In addition to that, control and prophylactic measures along with health promoting programs have to be encouraged on the studied farms so that infection reates are reduced.

Títulos de anticorpos aglutinantes induzidos por vacinas comerciais contra leptospirose bovina / Agglutinating antibody titers induced by commercial vaccines against bovine leptospirosis

No presente estudo, 100 fêmeas bovinas foram divididas em cinco grupos de 20 animais cada. Os grupos experimentais receberam quatro diferentes vacinas comerciais (B, C, D e E), e um grupo permaneceu como controle. Amostras foram colhidas no dia da aplicação da primeira dose e nos dias 3, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77, 84, 91, 120, 150 e 180 pós-vacinação (PV). A triagem dos animais foi feita pela análise sorológica com 6 antígenos de leptospiras, escolhendo-se os animais não reagentes. Os títulos de anticorpos foram monitorados pela soroaglutinação microscópica (SAM) com os sorovares Canicola, Grippotyphosa, Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Pomona e Wolffi. Todas as vacinas induziram, aos 3 dias PV, títulos de anticorpos aglutinantes para os sorovares Hardjo e Wolffi, que persistiram até o 150º dia PV. Os sorovares Hardjo e Wolffi induziram os maiores títulos de anticorpos aglutinantes. A vacina D, apesar de não possuir o sorovar Wolffi em sua composição foi capaz de induzir anticorpos aglutinantes contra este sorovar. Somente foram detectados anticorpos contra o sorovar Canicola nos animais vacinados com a bacterina D. A vacina que induziu os maiores títulos médios de anticorpos, considerando todos os sorovares testados foi a D.

In the investigation 100 heifers were used, divided into 5 groups of 20 animals each. The four experimental groups were vaccinated using distinct commercial polyvalent bacterines: B, C, D and E, and A group was the control. Samples were collected at days 0, 3, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77, 84, 91, 120, 150 and 180 from the first injection of the vaccine. The selection of the animals for the experimental groups was done based on a serological screening with 6 antigens of Leptospira sp. constituted by non-reagent animals. The vaccine titers were monitored using the microscopic agglutination test (MAT) for Canicola, Grippotyphosa, Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Pomona and Wolffi serovars. All vaccines used were capable to product agglutinins for the Hardjo and Wolffi serovars observed at 3 days after vaccination, remaining until the 150th day; those serovars induced the highest titres of agglutinins. Vaccine D, in spite of not containing the Wolffi serovar, induced the production of agglutinins to this serovar. Agglutinins to the Canicola serovar were only observed in the animals vaccinated with the D bacterine. Vaccine D induced the highest average titers of antibodies to all tested serovars.

Pesquisa de anticorpos anti-Rickettsia rickettsii em eqüinos do Centro de Controle de Zoonoses do município de São Paulo (CCZ/SP) / Detection of antibodies against Rickettsia rickettsii in equines of the Zoonosis Control Center of São Paulo Municipality (CCZ/SP)

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma zoonose transmitida por pelo menos duas espécies de carrapatos: Amblyomma cajennense e Amblyomma aureolatum. Os eqüinos assumem um importante papel de sentinela da FMB em áreas onde o carrapato vetor é o A. cajennense,por ser considerado hospedeiro primário dessa espécie de carrapato. O A. aureolatum, cujos hospedeiros primários são aves, alguns roedores silvestres e canídeos, é incriminado como vetor da doença na região da Grande São Paulo. Este trabalho objetivou pesquisar a presença de anticorpos contra Rickettsia rickettsii, agente da FMB, em eqüinos encaminhados ao Centro de Controle de Zoonoses do município de São Paulo (CCZ/SP) no período de 2003 a 2005. Após coleta de sangue, o soro obtido pela centrifugação foi submetido à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e os animais foram considerados positivos quando as amostras de soro apresentaram títulos ≥ 64. Durante os três anos, foram testados 363 amostras pela RIFI, sendo que 64 se mostraram reagentes: 6 (2003), 16 (2004) e 42 (2005). Os títulos finais variaram de 64 a 1.024. Os resultados obtidos demonstram uma baixa porcentagem de animais reagentes (17,6%) quando comparados com dados de literatura de áreas endêmicas para FMB onde o vetor é o A. cajennense, sugerindo não ser essa espécie responsável pela transmissão da doença na área de estudo

Brazilian Spotter Fever (BSF) is a tick-borne zoonosis transmitted byat least two tick species: Amblyomma cajennense and Amblyomma aureolatum. In areas where the tick vector is A. cajennense, equines are important for being considered primary hosts of this tick species. A. aureolatum, whose primary hosts include birds, some rodent species, and dogs, is incriminated as vector in the metropolitan region of São Paulo city. This work aimed to detect antibodies reactive to Rickettsia rickettsii in equines sent to the Zoonosis Control Center of São Paulo Municipality (CCZ/SP) during the period from 2003 to 2005. After blood collection, sera were obtained by centrifugation and tested by the indirect immunofluorescence assay (IFA) and animals were considered positive if sera presented titers ≥ 64. During three years, 363 equine sera sent to CCZ/SP, were tested by IFA, and 64 showed reactive: 6 (2003), 16 (2004) and 42 (2005). The end-point titers varied from 64 to 1.024. The results demonstrate a low percentage (17.6%) of reactive animals, when compared with literature data from BS Fendemic areas where A. cajennense is the vector, suggesting that this tick is not a main vector in the study area.

Perfil sorológico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em bezerros livres da infecção / Serological profile of colostral antibodies to Neospora caninum in infection free calves

Neospora caninum é considerado a principal causa de aborto bovino mundial. O diagnóstico laboratorial correto é muito importante para identificar os animais infectados e para aplicar medidas de controle. O objetivo deste trabalho foi mostrar o declínio de anticorpos colostral em bezerros. Este estudo empregou oito bezerros holandeses, recém-nascidos, machos, descendentes de vacas soronegativas para N caninum. Amostra de sangue pré-colostral foram colhidas destes bezerros e todos estavam soronegativos pra N. caninum. Estes bezerros foram alimentados com dois litros de um pool de colostro de vacas soropositivas dentro de duas horas após o nascimento. Amostras de sangue dos bezerros foram colhidas semanalmente até os animais soroconverterem negativo. As amostras foram testadas para anticorpos de N. caninum usando teste de imunofluorescência indireta nos títulos de 1:50; 1: 100 e 1:200. Os resultados mostraram que 3 dos 8 bezerros não soroconverteram e foram excluídos do estudo. Os restantes cinco bezerros soroconverteram em todos os títulos no quinto dia após a inoculação. No título 1:50, um bezerro permaneceu positivo por 21 semanas, dois por 20 semanas e um por 13 semanas. No título 1:100, um bezerro foi positivo por 15 semanas e o restante quatro bezerros por 13 semanas. No título 1:200, cada bezerro foi positivo por 1; 7; 12; 12 e 13 semanas, respectivamente. Estes resultados demonstram que o anticorpo colostral para N. caninum pode permanecer até 21 semanas após o nascimento nos bezerros e é muito importante excluir os bezerros até quatro meses de idade nos estudos de soroprevalência para impedir os resultados falso-positivos.

Neospora caninum is considered the main cause of bovine abortion worldwide. The correct laboratorial diagnose is very important to identify the infected animals and to apply control measure. The objetive of this study was to show the persistence period of colostral antibodies in calves. Eight newborn Holstein Friesan calves, males, were selected from N. caninum soronegative dams. Pre-colostral blood samples were collected of these calves and all of them were seronegative to N. caninum. They were fed with two liters of pooled colostrum from seropositive cows within two hours after birth. Blood samples were collected and tested weekly until the animals turned negative. Serum samples were tested for antibodies to N. caninum using indirect fluorescence antibody test at 1:50; 1: 100 and 1:200 dilutions. Antibodies were not detected from three out of eight calves and they were excluded from the study. The remaining 5 calves seroconverted in all dilutions at the fifth day after colostrums ingestion. At 1:50 dilution, one calf remained positive for 21 weeks, two for 20 weeks and one for 13 weeks. At 1:100, one calf was positive for 15 weeks and the remaining 4 calves for 13 weeks. At 1:200, each calf was positive for 1, 7, 12, 12 and 13 weeks, respectively. These results demonstrate that the colostral antibody to N. caninum may persist until 21 weeks after birth in calves and it?s very important to exclud the calves at the first month of age in the seroprevalence studies to avoid the false-positive results.

Prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum em rebanhos caprinos do município de Mossoró, Rio Grande do Norte / Prevalence to Toxoplasma gondii and Neospora caninum antibodies in goats from Mossoró, Rio Grande do Norte

A toxoplasmose é uma doença que acomete todos os animais endotérmicos, inclusive o homem. Nos caprinos pode causar transtornos reprodutivos, gerando grandes perdas econômicas. O Neospora caninum foi recentemente reconhecido e, apesar de causar problemas reprodutivos em caprinos, ainda são poucos os trabalhos realizados nesta espécie. Com o objetivo de verificar a soroprevalência destes agentes em caprinos do município de Mossoró, Rio Grande do Norte, amostras de soro de 381 animais (324 fêmeas e 57 machos) de 14 propriedades foram testadas pela Reação de Imunofluorescência Indireta a partir das diluições 1:64 e 1:50 para Toxoplasma gondii e N. caninum, respectivamente. Das 14 propriedades, 13 (92,8%) apresentaram animais soropositivos para T. gondii e quatro (28,6%), para N. caninum. Dos 381 animais amostrados, 65 estavam positivos para T. gondii (17,1%) e quatro (1,05%) para N. caninum. Não houve associação estatística entre a soropositividade aos agentes e o sexo, a presença de problemas reprodutivos e a presença de cães e/ou gatos nas propriedades. Os resultados indicaram uma baixa soroprevalência ao N. caninum no município, enquanto T. gondii encontra-se disseminado nos rebanhos caprinos da região

Toxoplasmosis is a disease affecting all endothermic animals, including humans. Infection can cause reproductive failures that generate severe economic losses in goats. Neospora caninum is a protozoan recently recognized, also causing reproductive abnormalities in goats, but there are few studies. Serum samples from 381 goats (324 females and 57 males) bred in 14 farms from Mossoró County, Rio Grande do Norte State, northeastern region of Brazil, were tested to determine the prevalence of T. gondii and N. caninum using the indirect fluorescent antibody test. Sera that reacted to dilutions ? 1:64 and ? 1:50, respectively, were considered positive. In 13 farms (92.8%), there were seropositive goats to T. gondii and in four farms (28.6%), there were seropositive animals to N. caninum. T. gondii prevalence was 17.1% (65/381) and N. caninum prevalence was 1.05% (4/381). There was no association between seropositivity to T. gondii or N. caninum and gender, presence of reproductive failures or presence of cats or dogs in the farms. Results indicate low N. caninum prevalence among goats from Mossoró County and T. gondii is widely distributed among goat herds in the same region

ELISA com MSP5 recombinante truncada para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale em bovinos / ELISA based on recombinant truncated MSP5 for detection of antibodies against Anaplasma marginale in cattle

Os objetivos deste estudo foram produzir e solubilizar a proteína MSP5 recombinante truncada de Anaplasma marginale, e avaliar seu desempenho em um ensaio de imunoadsorção enzimática indireto (ELISA) para detecção de anticorpos contra a riquétsia. O gene msp5, exceto a região N-terminal hidrofóbica, foi amplificado por PCR, clonado em plasmídeo pTrcHis-TOPO e expresso em Escherichia coli. A solubilização da proteína recombinante foi avaliada em diferentes pHs e concentrações de uréia. A sensibilidade e a especificidade do ensaio foram avaliados testando-se 66 soros de animais infectados experimentalmente com A. marginale e 96 soros negativos, com o estado de infecção destes animais confirmado por PCR. Um total de 1.666 amostras de soros bovino, provenientes do Brasil - Rio Grande do Sul (73), Mato Grosso do Sul (91), Pernambuco (86), Bahia (314) e Minas Gerais (267)-, Uruguai (32) e Costa Rica (803) foram testadas nos ELISAs com MSP5 truncada e com MSP1a recombinantes e a concordância entre os dois testes foi avaliada. O ELISA indireto com MSP5 truncada foi capaz de detectar animais infectados com 96,97 por cento de sensibilidade e 100 por cento de especificidade. Nos animais infectados experimentalmente, o ELISA detectou anticorpos do 12° até o último dia de observação (37° dia). Os ELISAs para MSP5 e MSP1a apresentaram concordância de 95,67 por cento, com índice kappa de 0,81. Os resultados discordantes apresentaram uma diferença significativa (p <0,001). Anticorpos contra A. marginale foram detectados em animais de todas as regiões estudadas. O ELISA com MSP5 recombinante truncada apresentou bom desempenho na detecção de anticorpos contra A. marginale, com alta sensibilidade e especificidade, representando uma importante ferramenta para o diagnóstico da anaplasmose bovina em estudos epidemiológicos.

The objective of this study was the production and solubilization of recombinant truncated MSP5 of Anaplasma marginale and the evaluation of its performance in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), to detect antibodies against the rickettsia in cattle. The fragment of msp5 gene, except the hydrophobic N-terminal region, was amplified by PCR, cloned in pTrcHis-TOPO plasmid and expressed in Escherichia coli. Solubilization of the recombinant protein was evaluated in different pHs and concentrations of urea. The sensibility and specificity of the assay were evaluated with 66 sera from cattle experimentally-infected and 96 sera from cattle free of A. marginale defined by polymerase chain reaction for msp5 gene. Serum samples from 1,666 cattle from Brazil - states of Rio Grande do Sul (73), Mato Grosso do Sul (91), Pernambuco (86), Bahia (314) and Minas Gerais (267), Uruguay (32) and Costa Rica (803), were tested by ELISAs with recombinant truncated MSP5 and with recombinant MSP1a, and the agreement between both ELISAs was calculated. ELISA with recombinant truncated MSP5 protein detected infected animals with sensibility of 96.97 percent and specificity of 100 percent. In cattle experimentally-infected, the ELISA detected antibodies from the 12th day post-infection (DPI) to the end of the experiment, at the 37th DPI. The agreement between the ELISAs with truncated MSP5 and MSP1a antigens was 95.67 percent, with a kappa index of 0.81. Disagreement results showed significative difference (p <0.001). Antibodies for A. marginale were detected in animals of the all the region analyzed. The ELISA with recombinant truncated MSP5 showed a good performance in ELISA for detention of antibodies against A. marginale, with high sensitivity and specificity, representing an important tool for the diagnosis of anaplasmose bovine in epidemiological studies.

Freqüência de cães reagentes para Neospora caninum em São Luís, Maranhão / Frequency of Neospora caninum in dogs from São Luís, Maranhão

The frequency of antibodies to Neospora caninum (Protozoa: Apicomplexa) in dog sera was investigated. Blood samples from 100 mongrel dogs, captured in the streets of São Luís, State of Maranhão, were analized using imunofluorescent antibody test. Forty five percent of the dogs were positive, and the titers ranged from 1:50 to 1:800. No sex difference was observed for frequency of N. caninum (60 percent in males and 40 percent in females). This is the first report of antibodies to N. caninum in dogs from Maranhão.

Antibodies specific to infectious bronchitis in broilers in Ceará state, Brazil

The experiment was carried out to determine the antibody levels to infectious bronchitis virus (IBV) in 1120 broilers of two broiler flocks, both from the same parental flock and free from previous vaccination. Forty chicks of each line were alloted to the control group and the sera were tested by indirect ELISA. The vaccination program consisted on the administration of commercial vaccines against IBV at 10 and 25 days of age. Chicks with low levels of maternal antibodies (Mab) did not show significant titers to the first vaccinal stimulus. They presented a vaccinal response to the second vaccinal stimulus reaching the top around GMT 1100 at 45 days. Chicks with high Mab titers did not show significant titers to the primary and secondary vaccinal stimuli, reaching peak levels of GMT 500 at 45 days. No antibody response was detected after the primary vaccination at day 10. A delayed antibody response was detected after the secondary vaccination on day 25, indicating no previous priming. The maternal antibody titers can interfere on the response to the first and second vaccinal stimulus promoting the neutralization of the first vaccination and a different response to the second one, according to high or low maternal antibodies.

Utilizaram-se 1120 pintos de um dia de idade, de duas linhagens, não vacinados, para determinar os níveis de anticorpos para o vírus da bronquite infecciosa (VBI) em frangos de corte no estado do Ceará. Quarenta aves de cada linhagem, colocadas em boxes isolados e não vacinadas, foram usadas como controle. As aves vacinadas contra VBI aos 15 e 25 dias foram submetidas a coletas de sangue periódicas para avaliação, pelo ELISA indireto, dos títulos de anticorpos para VBI. As aves com baixos títulos de anticorpos maternos (AcM) não apresentaram títulos significativos ao primeiro estímulo vacinal; para o segundo estímulo, o pico de resposta de GMT 1100 ocorreu aos 45 dias. As com elevado título de AcM não responderam significativamente à primeira vacinação e o pico de resposta ao segundo estímulo de GMT 500 ocorreu aos 45 dias. Não se verificou resposta de anticorpos para o primeiro estímulo vacinal, observando-se resposta tardia somente para o segundo. Os AcM podem ter interferido tanto no primeiro quanto no segundo estímulo, promovendo neutralização da primeira vacinação e resposta diferenciada para a segunda de acordo com o nível, elevado ou baixo, de AcM.

Presença de anticorpos anti-Neospora caninum e Toxoplasma gondii em cães com leishmaniose visceral da região de Araçatuba, São Paulo, Brasil / Presence of anti-Neospora caninum and Toxoplasma gondii antibodies in dogs with visceral leishmaniosis from the region of Araçatuba, São Paulo, Brazil

Dogs that had positive and negative sera to Leishmania chagasi from the region of Araçatuba, São Paulo, Brazil, were evaluated for the presence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii antibodies as potential co-infecting agents. Blood samples were collected from 204 dogs and out of them 98 were carriers of leishmaniosis. Sera were tested for the presence of anti-L. chagasi antibodies by ELISA, and anti-T. gondii and anti-N. caninum by an indirect fluorescent antibody test (IFAT). Age, gender, and association between the presences of anti-L. chagasi antibodies and seroprevalence to N. caninum and T. gondii were analyzed by chi-square test. Out of the 204 sera investigated, 36 (17.6%) were positive for N. caninum (IFAT=50) and 75 (36.8%) to T. gondii (IFAT=16) with titers that varied from 50 to 6400 for N. caninum, and from 16 to 16384 for T. gondii. The co-presence of anti-L. chagasi, N. caninum and T. gondii antibodies was observed in 17 (8.3%) dogs. Antibodies to N. caninum were observed in four (3.8%) out of 106 dogs that were negative for L. chagasi, and in 32 (32.6%) out of the 98 dogs that were positive for L. chagasi. Anti-T. gondii antibodies were found in 40 (41.0%) and in 35 (33.0%) of the 98 positive dogs and in 106 negative dogs for L. chagasi, respectively. An association between the presence of antibodies against L. chagasi and a positive response to N. caninum (p<0.001) was observed. The gender and age of the dogs did not show an association between the presence of antibodies and any of the agents studied (p>0.05), with the exception of age and presence of anti-L. chagasi antibodies, in which only a slight association was observed (p=0.038). Within this interaction, a higher number of dogs, older than four years, were positive for this agent when compared to other age groups.

Cães soropositivos e soronegativos à Leishmania chagasi da região de Araçatuba, São Paulo, Brasil, foram avaliados quanto à presença de possível co-infecção por Neospora caninum e Toxoplasma gondii. Amostras de sangue de 204 cães, sendo 98 portadores de leishmaniose, foram coletadas e os soros testados quanto à presença de anticorpos anti-L. chagasi pelo método de ELISA e anti-T. gondii e N. caninum pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Idade, sexo e possíveis associações entre a presença de anticorpos anti-L. chagasi e a soroprevalência de N. caninum e T. gondii foram analisados pelo teste do Qui-quadrado. Dos 204 soros examinados, 36 (17,6%) foram positivos para N. caninum (RIFI ³50) e 75 (36,8%) para T. gondii (RIFI ³16) com títulos que variaram de 50 a 6.400 para N. caninum, e de 16 a 16.384 para T. gondii. A co-presença de anticorpos anti-L. chagasi, N. caninum e T. gondii foi observada em 17 (8,3%) cães. Anticorpos anti- N. caninum foram observados em quatro (3,8%) dos 106 cães negativos e em 32 (32,6%) dos 98 cães positivos à L. chagasi. Anticorpos anti-T. gondii foram encontrados em 40 (41%) e em 35 (33%) dos 98 cães positivos e dos 106 cães negativos à L. chagasi, respectivamente. Foi observada associação entre a presença de anticorpos anti-L.chagasi e a presença de anticorpos anti-N. caninum (p<0,001). O sexo e a idade dos cães não apresentaram associação com a presença de anticorpos para nenhum dos agentes estudados (p>0,05), com exceção da idade e presença de anticorpos anti-L. chagasi , que apresentou uma associação fraca (p=0,038), com maior número de cães com mais de quatro anos de idade positivos a esse agente quando comparado às outras idades.

Comparação de métodos para determinação da prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em suínos dos Estados de São Paulo e Pernambuco - Brasil / Methodologies Comparison for Prevalence of Anti-toxoplasma Gondii Antibodies Determination in Swine from São Paulo and Pernambuco States - Brazil / Comparacíon de metodologías para determinación de la prevalencia de anticuerpos anti-toxiplasma gondii en cerpos de los estados de São Paulo y pernambuco - Brasil

Pesquisou-se a presença de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em soros de suínos, pelas técnicas de reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e método de aglutinação direta (MAD). Foram examinadas 759 amostras de soros de suínos, oriundas de 25 propriedades, sendo 17 do Estado de São Paulo que responderam a questionário de levantamento de dados epidemiológicos e zoosanitários. O número de amostras positivas ao MAD foi 10 (1,32) e pela RIFI, 16 (2,11). Os resultados entre os testes apresentaram substancial concordância, com coeficiente kappa κ=0,6619, concordância de resultados positivos de 66,67 e concordância de resultados negativos de 99,46. Não foram encontradas associações importantes entre as variáveis epidemiológicas e zoosanitárias, e o resultado do exame sorológico.

ABSTRACT: There has been researched the presence of antibody against Toxoplasma gondii in swine sera by the techniques of immunofl uorescent antibody test (IFAT) and modifi ed agglutination test (MAT). There have been examined 759 samples of swine sera from 25 properties, being 17 in Sao Paulo state and 8 in Pernambuco. From São Paulo, 17 answered the questionnaire for the epidemiological and zoo sanitary study. The number of positive samples to the MAT was 10 (1.32%) and to IFAT 16 (2.11%). The results between the tests presented substantial agreement: kappa coeffi cient κ=0.66, agreement with positive results of 66.67% and agreement with negative results of 99.46%. There haven't been found important association between the epidemiological and zoo sanitary variables and the results of serological examination.

RESUMEN: Fue investigado la presencia de anticuerpos anti-Toxoplasma gondii en sueros de cerdos, por las técnicas de reacción de imunofl uorescencia indirecta (RIFI) y por el teste de aglutinación modifi cado (TAM). Fueron examinadas 759 muestras de 25 haciendas, 17 en el Estado de São Paulo y 8 en el Estado de Pernambuco. Siendo que de estas, 17 respondieron a un cuestionario para el estudio epidemiológico y zoosanitario. El número de muestras positivas en el TAM fue 10 (1,32%) y en el RIFI 16 (2,11%). Los resultados entre las pruebas presentaron una concordancia substancial: con coefi ciente kappa κ=0,66, concordancia de resultados positivos de 66,67% y concordancia de los resultados negativos de 99,46%. No fueron encontradas asociaciones importantes entre las variables epidemiológicas y zoosanitarias y el resultado del examen suerológico.